1、目的
建立無菌室浮游菌測試標準操作程序，規(guī)范無菌室浮游菌的檢測。
2、范圍
適用于無菌室（包括潔凈工作臺）浮游菌的測試和環(huán)境驗證。
3、職責
QA、QC人員遵照執(zhí)行。
4、內(nèi)容
4.1參考標準：GB/T 16293-2010
4.2測試方法
本測試方法為計數(shù)濃度法，即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基），經(jīng)若干時間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計數(shù)，以判定該無菌室的微生物濃度。
4.3測試儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基
浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿（選用與儀器相適應(yīng)的培養(yǎng)皿）、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。
4.4測試狀態(tài)及測試時間
4.4.1靜態(tài)和動態(tài)兩種狀態(tài)均可進行測試，靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。
4.4.2在靜態(tài)a測試時，單向流無菌室（區(qū)），測試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行時間不少于10分鐘后開始；非單向流無菌室（區(qū)），測試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘后開始。在靜態(tài)b測試時，單向流無菌室（區(qū)），測試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10分鐘自凈后開始；非單向流無菌室（區(qū)），測試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20分鐘自凈后開始。
4.5采樣點的確定
4.5.1zui少采樣點數(shù)目見表1，每次zui小采樣量見表2。
表1 zui少采樣點數(shù)目：

表2 zui小采樣量：

4.5.2采樣點位置布置宜力求均勻，避免采樣點在局部區(qū)域過于稀疏，采樣點按照《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》附件×××車間潔凈度監(jiān)測采樣點布局圖的要求布置，每個采樣點一般采樣一次。
4.5.3工作區(qū)采樣點位置離地0.8m~1.5m左右（略高于工作面），送風口測點位置離開送風面30cm左右，可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。
4.6測試準備
4.6.1采樣器在進入被測區(qū)域前先清潔表面，然后用75%酒精消毒一遍或存放于被測區(qū)域內(nèi)，與被測試區(qū)域一起消毒（用于*無菌室的采樣器必須預先放在被測房間內(nèi)）。
4.6.2A/B級區(qū)采用一次性培養(yǎng)皿，其它區(qū)域按無菌操作要求，在中檢室潔凈工作臺上提前制備培養(yǎng)備用（將滅菌后的培養(yǎng)基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培養(yǎng)皿每個傾注約20ml培養(yǎng)基，Φ150mm培每個傾注約30ml培養(yǎng)基），培養(yǎng)皿加蓋后在室溫下放至凝固。自制好的培養(yǎng)皿在無菌室內(nèi)存放不超過48小時，2~8℃保存的培養(yǎng)皿一般不超過1周，一次性培養(yǎng)皿在標注的有效期內(nèi)使用，過期不得使用。
4.6.3A/B級區(qū)使用的培養(yǎng)皿在區(qū)域消毒前一次性傳入，隨環(huán)境一起消毒，在消毒液取用間架子上暫存，在有效期內(nèi)使用。若需臨時傳入，則必須在前一天臭氧消毒前通過C級與B級傳遞窗傳入B級區(qū)進行臭氧消毒，第二天使用。傳入前表面也必須用75%酒精擦拭。其它區(qū)域用培養(yǎng)皿按物品傳入要求當天傳入使用。
4.6.4采樣前，先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面（FKC型浮游空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭）。
4.6.5測試具體操作見浮游菌采樣器標準操作程序或浮游空氣塵菌采樣器標準操作程序。
4.6.6采樣結(jié)束后，蓋上培養(yǎng)皿蓋子，在培養(yǎng)皿上標注所有信息（包括產(chǎn)品批號，放置位置等），將培養(yǎng)皿用適宜的方式捆扎，倒置于30~35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不少于2天。
4.6.7培養(yǎng)結(jié)束后逐個檢查培養(yǎng)皿，用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)、標記，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。
4.7測試記錄應(yīng)包含以下內(nèi)容
4.7.1被測試區(qū)域名稱、測試日期、測試依據(jù)、測試者姓名、測試儀器及測試方法的描述，測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)，采樣點數(shù)目，測試次數(shù)、采樣流量，測試結(jié)果（包括所有統(tǒng)計計算資料）等。
4.7.2若為動態(tài)測試，還應(yīng)記錄現(xiàn)場操作人員數(shù)量，現(xiàn)場設(shè)備運轉(zhuǎn)情況等。
4.8結(jié)果計算
4.8.1用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
4.8.2每個測點的浮游菌平均濃度計算按下式進行。
4.9結(jié)果評定
4.9.1每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。
4.9.2在靜態(tài)測試時，若某測點的浮游菌平均菌濃度超過評定標準，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判為符合。
4.9.3若有超過規(guī)定者，必須及時與生產(chǎn)部門，對該區(qū)域進行消毒或其它處理，然后重新測試至合格。
4.10日常監(jiān)控
4.10.1浮游菌日常監(jiān)控設(shè)糾偏限度和警戒限度（限度范圍及取樣頻次見《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》），以保證無菌室（區(qū)）的微生物濃度受到控制，定期檢測以檢查微生物負荷以及消毒劑的效力，并作傾向分析。靜態(tài)和動態(tài)的監(jiān)控都可以采用該方法。
4.10.2對于浮游菌的取樣頻次，如果出現(xiàn)下列情況應(yīng)考慮修改，在評估以下情況后，也應(yīng)確定其他項目的檢測頻次。
（1）連續(xù)超過糾偏限度和警戒限度；
（2）停工時間比預計延長；
（3）關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在；
（4）在生產(chǎn)期間，空氣凈化系統(tǒng)進行任何重大的維修；
（5）日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)；
（6）消毒規(guī)程的改變；
（7）引起生物污染的事故等；
（8）當生產(chǎn)設(shè)備有重大維修或增加設(shè)備時；
（9）當無菌室（區(qū)）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動時。
4.11注意事項
4.11.1JYQ-Ⅱ型浮游菌采樣器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5分鐘，檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時間。
4.11.2單向流無菌室（區(qū)）或送風口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對氣流方向，非單向流無菌室（區(qū)），采樣口向上。
4.11.3測試時必須穿著與被測區(qū)域潔凈度級別要求相適應(yīng)并經(jīng)高壓滅菌后的無菌服。
4.11.4布置采樣點時，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風口。
4.11.5采樣結(jié)束，需用75%酒精噴射采樣器罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤（FKC型浮游空氣塵菌采樣器噴射采樣頭和保護蓋）。
4.11.6應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。
4.11.7每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作為對照培養(yǎng)；培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。
4.11.8采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
4.11.9由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。
4.11.10必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進行校驗。